粒曼致力于提供细胞体外基因敲除解决方案，专门为客户定制细胞基因敲除服务。目前，我们已推出多种细分的敲除服务，欢迎联系尊龙凯时团队以获取详细的技术路线及成功案例资料。

我们提供真核细胞体外基因敲除定制服务，并将定期更新Q&A，以进一步提升服务质量。以下是Q&A【2503版】的部分内容：

1-20问涵盖了关于基因敲除定制服务的相关问题，建议您详细查看服务指南以及尊龙凯时高通量基因敲除定制服务（RNP法）Q&A【2409版】。

21. 如何验证基因敲除是否成功？

22. 精准敲除与模糊敲除有什么区别？

(1) 精准敲除是通过同源重组（HDR）机制，在目标基因中精确地引入修饰（如特定片段的删除、点突变或插入），从而完全或部分失活基因功能。这种方法的实验策略通常不同于传统基因敲除。通常提到的基因敲除多是指模糊敲除。尊龙凯时为客户提供精准敲除的定制服务，专注于靶基因指定区域的特定核苷酸序列进行敲除、敲入及突变等处理。

(2) 模糊敲除则是通过非同源末端连接（NHEJ）机制，随机引入插入或缺失突变，导致基因编码框的移位或提前终止，从而破坏基因功能。

23. 利用CRISPR/Cas9方法，能够敲除的最大片段范围是多少？理论上，CRISPR/Cas9可以实现1kb至1Mb范围内的敲除，结合多靶点切割技术或其他技术（如CRISPRa/i、表观遗传修饰）可实现超大片段敲除（1Mb）。

24. 如何提高原代细胞的编辑效率？可通过病毒载体（慢病毒/AAV整合至基因组）、电场诱导细胞膜穿孔、核转染直接导入Cas9-RNP，或使用脂质纳米颗粒包裹Cas9-sgRNA复合物来实现。

25. 如何提升基因敲除的效率？

26. 如何分析基因敲除后的表型变化？

27. 如何区分纯合敲除与杂合敲除？

28. CRISPR RNP法适用的细胞及场景有哪些？

总结来说，CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法是将多条体外合成的single-guide RNA（sgRNA）与Cas9蛋白混合形成核糖核蛋白复合物，通过电转化或脂质体转染的方式迅速递送至细胞内。这种方法能够有效构建高效、稳定的细胞池，避免传统方法中慢病毒/质粒的复杂步骤和潜在的基因组不稳定性问题。

随着尊龙凯时在基因敲除细胞系构建领域的不断创新，CRISPR/Cas9 RNP法将在不久的将来全面替代传统方式，成为生物医药研究中的重要技术。